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穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建

穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建是指將外源DNA克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞后，利用載體中所含的選擇標(biāo)志進(jìn)行篩選，得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。

泓迅生物提供一系列穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，用于全長(zhǎng)抗體及抗體片段、Fc融合蛋白、多種細(xì)胞表面受體、胞質(zhì)和分泌蛋白等重組蛋白/抗體的穩(wěn)定及規(guī)?；a(chǎn)。

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

外源基因嚴(yán)格鑒定，細(xì)胞無污染
CHO1.0穩(wěn)轉(zhuǎn)載體，配合嘌呤霉素+MTX篩選系統(tǒng)
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及Pool篩選，周期8周左右
可對(duì)重組蛋白/抗體全長(zhǎng)或片段進(jìn)行個(gè)性化表達(dá)

服務(wù)詳情

服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)詳情	轉(zhuǎn)染方式	系統(tǒng)	項(xiàng)目周期	驗(yàn)證方式	交付項(xiàng)目
常規(guī)過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及pool篩選	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 ? 慢病毒轉(zhuǎn)染	293T、Hela、A549等	2-3周	Western Blot、免疫熒光（IF）驗(yàn)證	? 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株pool
常規(guī)過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及單克隆篩選，篩選至少20個(gè)單克隆細(xì)胞株	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 ? 慢病毒轉(zhuǎn)染	293T、Hela、A549等	5-6周		? 1-3株穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 ? 表達(dá)報(bào)告
抗體穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及pool篩選	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染	CHO1.0	8周		? 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株pool

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服務(wù)流程

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泓迅生物將GFP序列構(gòu)建到CHO 1.0載體上，然后將構(gòu)建好的GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到CHO細(xì)胞中進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及Pool篩選，獲得GFP-CHO穩(wěn)轉(zhuǎn)株，經(jīng)過多輪藥物篩選后，顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞所占比例大于90%。

GFP-CHO穩(wěn)轉(zhuǎn)株陽(yáng)性率

常見問題

構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株有必要嗎？

如果您需要對(duì)過表達(dá)或者表達(dá)降低目的基因的細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，那么構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株是有必要的。
第一，可以減少不同批次實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染效率差異帶來的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異，提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。
第二，構(gòu)建好細(xì)胞系后不必再進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以及反復(fù)制備質(zhì)粒，減少工作量。
第三，不再使用價(jià)格高昂的轉(zhuǎn)染試劑，節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。

所有細(xì)胞株都可以構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系嗎？

不是所有的細(xì)胞株都能構(gòu)建成為穩(wěn)定細(xì)胞系的。構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系需要滿足2個(gè)條件：

1、細(xì)胞能穩(wěn)定傳代；

2、細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率滿足要求。

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