研究基因在代謝通路或某些特定疾病發(fā)生過(guò)程中的功能,對(duì)于疾病機(jī)理研究及藥物研發(fā)具有非常重要的意義。新一代基因編輯技術(shù)CRISPR以其操作簡(jiǎn)單和通用的獨(dú)特優(yōu)勢(shì),成為開(kāi)展正向遺傳學(xué)篩選實(shí)驗(yàn)強(qiáng)有力的工具。利用CRISPR技術(shù)建立可能與某類(lèi)功能相關(guān)的突變體庫(kù),通過(guò)功能性篩選和富集、PCR擴(kuò)增及深度測(cè)序分析,確認(rèn)與這類(lèi)功能相關(guān)的基因。
泓迅生物利用獨(dú)創(chuàng)的“GPS”(Genotype,Phenotype,Synotype)平臺(tái),提供基于CRISPR sgRNA文庫(kù)的一站式基因功能篩選服務(wù)。我們專(zhuān)利的Syno?合成技術(shù)平臺(tái),可以快速高效地實(shí)現(xiàn)sgRNA文庫(kù)構(gòu)建,并包裝成慢病毒混合文庫(kù)后轉(zhuǎn)染細(xì)胞。結(jié)合高通量/高內(nèi)涵篩選平臺(tái),利用控制細(xì)胞存活、結(jié)合免疫染色、流式細(xì)胞術(shù)等手段篩選得到所需細(xì)胞,最終通過(guò)測(cè)序等方法推斷出發(fā)揮作用的靶基因。
服務(wù)項(xiàng)目 | 服務(wù)詳情 | 周期 |
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sgRNA設(shè)計(jì) | 針對(duì)目標(biāo)基因群進(jìn)行sgRNA序列設(shè)計(jì) 每個(gè)基因設(shè)計(jì)3-6條sgRNA(無(wú)物種限制) | 1-2周 |
芯片合成 | 將所設(shè)計(jì)的所有sgRNA及陰性對(duì)照合成在一張芯片上 | 3-4周 |
sgRNA文庫(kù)構(gòu)建 | 將sgRNA構(gòu)建到客戶(hù)的目標(biāo)載體上 | 2-3周 |
文庫(kù)質(zhì)粒大抽 | 根據(jù)發(fā)貨量進(jìn)行轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒抽提 | 1周 |
文庫(kù)質(zhì)檢及NGS驗(yàn)證 | 庫(kù)容量大于100x、覆蓋率>99% 文庫(kù)正確率>80%、文庫(kù)的均一性<5-10 | 2-3周 |
病毒包裝 | 病毒滴度>108TU/mL | 2-3周 |
文庫(kù)細(xì)胞pool構(gòu)建 | 覆蓋度高達(dá)99%、支持任何癌細(xì)胞系為目的細(xì)胞的構(gòu)建 | 6-9周 |
高通量篩選 | 正向篩選實(shí)驗(yàn)、反向篩選實(shí)驗(yàn)、 藥物抗性實(shí)驗(yàn)、報(bào)告基因檢測(cè) | 2-3周 |
基因功能分析與驗(yàn)證 | 文庫(kù)QC、樣本相關(guān)性、目標(biāo)基因分析等 | 1-2工作日 |